RhoGDI2与β2肾上腺素能受体减敏的关系及机制研究

目的 探讨Rho鸟苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)对气道平滑肌细胞β2肾上腺素能受体(β2 AR)减敏的关系.方法 培养人气道平滑肌细胞,以RhoGDI2高表达质粒转染后,用Western blot法检测RhoGDI2的蛋白表达量,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞内腺苷-3',5'-环化一磷酸(cAMP)的含量,并探究两者关系.检测转染后细胞膜表面β2AR蛋白表达量随时间的变化,及转染后G蛋白耦联受体激酶2 (GRK2)、蛋白激酶A(PKA)磷酸化位点蛋白表达情况,再加入GRK2及PKA抑制剂后,用ELISA检测细胞内cAMP的变化.结果 RhoGDI2高表达组与阴性对照组及空白组相比,高表达组平滑肌细胞内cAMP含量降低,差异有统计学意义,转染后24 h、36h、48 h、60 h、72 h气道平滑肌细胞膜表面β2AR蛋白表达量随转染时间的延长呈下降趋势;RhoGDI2高表达组的β2 AR的355,356丝氨酸位点磷酸化水平高于345,346位丝氨酸位点磷酸化水平.RhoGDI2转染后加GRK2抑制剂组、RhoGDI2转染后加PKA抑制剂组与空白对照组相比,气道平滑肌细胞内cAMP含量降低,其中,RhoGDI2转染后加PKA抑制剂组与空白对照组相比差异有统计学意义,RhoGDI2转染后加GRK2抑制剂组与空白对照组相比差异无统计学意义.结论 ①RhoGDI2高表达可引起人气道平滑肌细胞β2AR的减敏.②RhoGDI2引起人气道平滑肌细胞膜表面β2AR的减敏是通过GRK2磷酸化β2AR起作用.