锡兰钩虫HPI基因的原核表达与生物信息学分析

目的 克隆表达锡兰钩虫血小板抑制剂(hookworm platelet inhibitor,HPI)基因,并研究其编码蛋白的生物学特性.方法 以锡兰钩虫cDNA为模板,参考已公布的犬钩虫血小板抑制剂(AcaHPI)基因序列设计特异性引物,运用RT-PCR扩增其AceHPI基因序列,并将其连接至pET-28a表达载体,诱导其表达并纯化.利用在线软件对其编码蛋白的氨基酸序列进行同源性比对和生物信息学分析.结果 锡兰钩虫AceHPI基因的ORF序列全长603 bp,编码200个氨基酸,与犬钩虫AcaHPI氨基酸序列同源性为91％.构建的重组表达质粒pET28a-AceHPI经诱导表达与纯化,获得了分子质量约为26kDa的可溶性融合蛋白.预测分析表明该蛋白为疏水蛋白,前17个氨基酸为信号肽序列且无跨膜结构域.结论 成功克隆表达了AceHPI基因并对其编码氨基酸进行了生物信息学分析,为进一步研究AceHPI在感染宿主体内的作用机制奠定了基础.