分支杆菌噬菌体 Leo 生物学特性及抗结核作用

目的：明确分支杆菌噬菌体L eo的生物学特性及其抗结核作用，为“鸡尾酒疗法”筛选候选噬菌体。方法采用双层平板法制备噬菌体Leo ，观察噬菌斑形态；电镜观察噬菌体颗粒形态；提取噬菌体DNA ，限制性内切酶酶切分析确定其核酸类型；以不同MOI扩增噬菌体Leo ，确定最佳MOI及最低MOI；通过一步生长曲线，确定潜伏期及裂解量；采用终点滴定反浊法测定耻垢分支杆菌对噬菌体L eo的耐受突变率；检测噬菌体L eo对酒精、温度的耐受性及在不同p H下的裂解能力；通过体外杀结核分枝杆菌实验，明确噬菌体L eo对结核分枝杆菌的杀灭作用。结果 L eo噬菌斑圆形透明，边缘清晰，含对称的多面体头部，直径（70±3．0）nm ，可弯曲的尾部，尾长（211±31．7）nm ；其基因组能被限制性内切酶 HindⅢ、BglⅠ切开；最佳MOI为0．00001，最低MOI为0．0001，潜伏期为150 min ，裂解量74，耐受突变率为10‐7。Leo对温度、酒精敏感，在pH 7．4和pH 5．0时均能裂解宿主菌。Leo作用于结核分支杆菌72 h后，Leo组菌量明显低于空白组（P ＜0．05）。结论分支杆菌噬菌体Leo属长尾噬菌体科，双链DNA噬菌体，能够杀灭结核分支杆菌，可作为“鸡尾酒疗法”的候选噬菌体。