人工合成肺孢子菌p55抗原串联基因真核表达载体的构建及表达
Chinese Journal of Zoonoses（2015）
摘要
目的 研究肺孢子菌p55抗原人工合成串联基因的真核表达载体构建及其表达鉴定.方法 从肺孢子菌p55蛋白5个变异体中选取可能在肺孢子菌肺炎中起重要作用抗原表位,串联合成一段多表位基因,命名为TAG.将TAG双酶切后克隆到pIRES hrGFP-1a真核表达载体,构建重组质粒pIRES-hrGFP-1a/TAG,将重组质粒转染至感受态TG-1大肠杆菌中进行扩增后,经提取纯化质粒再转染至HEK293细胞,用Western blot鉴定蛋白表达水平.结果 构建的pIRES-hrGFP-1a/TAG重组质粒经酶切后测序鉴定,证明其序列正确,成功转染至HEK293细胞,Western blot检测其在HKE293细胞中能进行有效基因表达.结论 本研究构建了pIRES-hrGFP-1a/TAG重组质粒,并在HEK293细胞中成功表达,为进一步阐明TAG的免疫保护功能以及核酸疫苗的研究奠定基础.
更多关键词
Pneumocystis carinii,p55 antigen,tandem antigen gene,eukaryotic cell expression
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