青藏高原牦牛携带屎肠球菌及其毒力基因和耐药性检测

目的 了解青藏高原牦牛携带屎肠球菌(Enterococcusfaecium)情况,以及耐药性和毒力基因.方法 使用链球菌培养基分离细菌;使用生化反应和16s rDNA序列分析方法鉴定;采用PCR方法检测从牦牛粪便中分离的屎肠球菌携带细胞溶血素(cytolysin,cylA)、明胶酶E(gelatinase,gelE)、表面蛋白(enterococcal surface protein,esp)、胶质蛋白粘附素collagen-binding-adhesin of Enterococcal faecium,acm)、聚集物质(aggregation substance,asa1)及透明质酸酶(hyalronidase,hyl)6种毒力基因的情况;应用K-B纸片法对屎肠球菌分离株进行16种抗生素的敏感性分析;参照PulseNet脉冲场凝胶电泳(Pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)实验方法对屎肠球菌分离株进行PFGE分型分析.结果 我们从320份牦牛粪便分离到33株屎肠球菌.这些菌株中毒力基因asa1的阳性率最高,为6.1％,acm和hyl次之,均为3.0％,其他毒力基因皆未检出.33株牦牛屎肠球菌中,有19株菌株具有抗生素耐药性,包括4株多重耐药菌株和15株单耐菌株.牦牛屎肠球菌对利福平耐药率最高,为48.5％;对其他抗生素的耐药率从高到低依次为青霉素G15.2％、四环素12.1％、强力霉素12.1％、红霉素9.1％、环丙沙星6.1％、氨苄西林6.1％、高浓度庆大霉素6.1％、磷霉素6.1％、左氧氟沙星6.1％.所有菌株对万古霉素、替拉考宁和氯霉素均敏感.细菌染色体DNA酶切片段的PFGE分析发现,33株屎肠球菌分离株共产生30种PFGE带型,可分为A-H 8个聚类群,耐药菌株分布在6个聚类群中.结论 青藏高原牦牛携带屎肠球菌,呈现高度遗传多态性,部分菌株携带毒力基因,对多种抗生素耐药.研究提示,屎肠球菌可能会通过牦牛相关食品传播.