甲型副伤寒沙门菌ompN基因原核表达系统构建及其产物免疫保护作用

目的 了解甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白ompN基因携带率及其重组表达产物抗原性和免疫保护作用.方法 采用PCR扩增甲型副伤寒沙门菌参考标准株50001及126株临床菌株ompN基因并测序.构建ompN基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提取目的重组蛋白rOmpN.采用家兔免疫法和ELISA检测rOmpN免疫原性.微量肥达试验和激光共聚焦显微镜法分别检测OmpN在甲型副伤寒沙门菌株中表达率及其膜定位.采用小鼠感染模型了解rOmpN对甲型副伤寒沙门菌致死性感染的免疫保护作用.结果 所有甲型副伤寒沙门菌株中均扩增出全长ompN基因片段,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达98.6％～99.9％和98.7％～100％.OmpN是甲型副伤寒沙门茵跨膜蛋白.ompN基因表达系统能表达rOmpN,免疫家兔后能产生高效价抗血清.98.2％(55/56)甲型副伤寒病人血清标本中rOmpN-IgG阳性,rOmpN兔抗血清能有效凝集甲型副伤寒沙门菌.100和200 μg rOmpN对感染小鼠的免疫保护率分别为60.0％(9/15)和73.3％(11/15).结论 甲型副伤寒沙门菌ompN基因分布广泛且序列保守,rOmpN有较强的抗原性和免疫保护作用.