酵母双杂交筛选与CVB3 VP3相互作用的人心脏蛋白

目的：从人心脏cDNA文库中筛选与B3型柯萨奇病毒（coxsackievirus group B type 3，CVB3）结构蛋白VP3相互作用的蛋白，为进一步研究CVB3分子致病机制提供新的线索。方法构建酵母双杂交重组质粒（pGBKT7-VP3），转化至感受态酵母菌AH109，检测BD-cMyc-VP3融合蛋白自激活，应用酵母双杂交筛选与CVB3 VP3相互作用的人心脏蛋白。对阳性候选克隆进行测序和同源性比对分析；α-半乳糖苷酶活性定量分析 V P3与各阳性蛋白之间相互作用的强弱。结果诱饵质粒pGBKT7-VP3构建成功，检测到BD-cMyc-VP3融合蛋白在AH109中表达，且诱饵蛋白VP3在酵母中不存在自激活，从人心脏cDNA文库中筛选到10个与CVB3 VP3相互作用的蛋白：真核翻译起始因子4A2、羟酰辅酶A脱氢酶三官能蛋白转录变体3、肌钙蛋白I3型、平滑肌蛋白3、线粒体乙醛脱氢酶2等。结论本研究成功应用酵母双杂交技术筛选出与CVB3 VP3相互作用的10个蛋白。为研究CVB3引起心肌炎和心肌疾病的分子致病机制提供了一些新的线索。