siRNA介导BMP7基因沉默对人肝癌HepG2细胞增殖和迁移的影响

目的:采用RNA干扰技术(RNA interference, RNAi)抑制骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP7)的表达,观察BMP7基因沉默对人肝癌HepG2细胞增殖和迁移的影响.方法:设计并化学合成针对BMP7的3对小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),使用TransLipid@HL Transfection Reagent瞬时转染人肝癌HepG2细胞,并设正常对照组、Negative-siRNA组及BMP7-siRNA-1、BMP7-siRNA-2、BMP7-siRNA-3转染组.运用半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)和Western blot法分别从mRNA和蛋白水平检测HepG2细胞中BMP7的表达变化,选取沉默效果最明显的siRNA片段进行后续实验.采用MTT比色法及Transwell迁移实验分别检测转染后细胞增殖及迁移的变化,Western blot法检测各组细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase3)表达情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期变化.结果:RT-PCR和Westem blot结果显示,BMP7-siRNA-3转染组BMP7抑制效果最明显(P＜0.01),选取BMP7-siRNA-3转染组进行后续实验.MTT比色法显示,转染后48,72 h细胞生长增殖均受到抑制(P＜0.01).Transwell迁移实验显示,转染24 h后,BMP7-siRNA-3转染组HepG2细胞穿膜数均明显低于正常组和Negative-siRNA组(P＜0.01).Westem blot检测发现BMP7-siRNA-3组比对照组的细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase3表达增加(P＜0.01),Bcl-2表达差异无统计学意义.流式细胞仪检测发现转染后48 h,BMP7-siRNA-3组HepG2细胞被阻滞在G2期(P＜0.01).结论:siRNA介导BMP7基因沉默对人肝癌HepG2细胞的增殖与迁移具有抑制作用,对细胞凋亡有促进作用,并可阻滞细胞在G2期.