氧化型低密度脂蛋白促进类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖及炎性因子mRNA表达的研究

目的:探讨氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）对RA患者成纤维样滑膜细胞（FLS）增殖及炎性因子mRNA表达的影响。方法:采用组织块贴壁法分离培养RA-FLS，4~6代细胞用于后续实验。不同浓度的人Ox-LDL刺激RA-FLS 24 h，MTS实验检测细胞增殖情况，实时（RT）-PCR法检测炎性因子IL-6、TGF-β、IL-8、TNF-α及清道夫受体CD36、结合磷脂酰丝氨酸和氧化脂蛋白的清道夫受体（SR-PSOX）mRNA表达水平。siRNA特异性敲减SR-PSOX，RT-PCR法检测敲减效果，同时验证SR-PSOX基因敲减后各相关基因的表达。统计学分析采用 t检验， F检验。 结果:不同浓度Ox-LDL（10、25、50 μg/ml）可明显促进RA-FLS的增殖，其吸光度（ A）值（490 nm）分别为：（1.04±0.15）、（1.05±0.14）、（1.00±0.10），均高于对照组（0.81±0.04），差异有统计学意义（ F=4.737， P<0.01）。在炎性因子mRNA表达方面，与对照组相比较，50 μg/ml和100 μg/ml Ox-LDL可显著促进IL-6 mRNA的表达（ F=14.709， P<0.01）；不同浓度Ox-LDL均可抑制RA-FLS中TGF-β mRNA的表达（ F=299.074， P<0.01），而对IL-8、TNF-α mRNA的表达无明显影响。进一步的机制探讨发现Ox-LDL可促进RA-FLS高表达SR-PSOX（ F=68.636， P<0.01），并抑制CD36的表达（ F=18.085， P<0.01）。siRNA特异性敲减SR-PSOX，可显著抑制Ox-LDL刺激RA-FLS表达IL-6 mRNA（ t=3.875， P<0.01），而对TGF-β mRNA表达水平无显著影响（ t=-0.193， P>0.05）。 结论:Ox-LDL可显著促进RA-FLS的增殖，同时Ox-LDL可能通过上调SR-PSOX的表达促进了IL-6 mRNA的表达，提示Ox-LDL可能参与了RA的滑膜增生及炎症持续过程。