中性粒细胞胞外诱捕网在类风湿关节炎致病机制中的初步探究

目的 探究中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLSs)的潜在作用.方法 取RA患者滑膜组织分离培养;提取健康人外周血中性粒细胞,刺激NETs形成并提取NETs;用CellTiter 96(R) AQueous单溶液试剂(MTS)增殖实验评估NETs对RA-FLSs增殖的影响;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)测定NETs持续刺激RA-FLSs 60 h后细胞中结缔组织生长因子(CTGF) mRNA的表达情况.采用配对样本t检验和单因素方差分析对结果进行处理.结果 分离纯化的中性粒细胞体外刺激可形成NETs,提取的NETs测定DNA浓度为58.5 ng/μl(1×106细胞);与对照组(0μl NETs)相比,NETs能促进RA-FLSs增殖,且随着NETs浓度增加其促进RA-FLSs增殖的能力也增强(F=99.519,P＜0.01);与对照组(0μl NETs)相比,10μl NETs可以明显促进RA-FLSs增殖(t=-12.226,P＜0.01);用脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase Ⅰ)预处理NETs后,其促进RA-FLSs增殖的作用受到抑制(t=-2.376,P=0.049);NETs能刺激RA-FLSs内CTGF mRNA表达上调[(30.7±0.5),t=12.13,P＜0.01].结论 NETs在体外能促进RA-FLSs增殖并刺激RA-FLSs内CTGF mRNA表达上调.