血清淀粉样蛋白A通过Toll样受体4途径诱导类风湿关节炎中性粒细胞胞外诱捕网形成

目的 研究血清淀粉样蛋白A(SAA)对RA中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)形成的作用及其分子机制.方法 提取RA与健康志愿者的外周血中性粒细胞,①体外培养,观察SAA诱导NETs形成.②中性粒细胞体外培养,分对照、SAA、SAA+anti-Toll样受体(TLR)4-Ab、脂多糖、脂多糖+anti-TLR4-Ab及anti-TLR4-Ab,共6组,分别给予相应刺激,观察NETs形成并计算百分率,荧光染色法检测培养上清中DNA的含量.采用F检验和t检验分别对多组及2组结果进行统计分析.结果 ①提取外周血中性粒细胞纯度在95％以上.显微镜下观察到部分中性粒细胞核向外扩散与中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)共定位的网状结构,即NETs.RA患者组SAA刺激中性粒细胞后形成的NETs明显多于Tris-HCl刺激组(19.1±0.8与7.4±0.5,t=12.30,P＜0.05).②与SAA组相比,anti-TLR4-Ab预处理后,加入SAA刺激中性粒细胞形成的NETs明显减少(5.7±0.4与14.7±1.1,t=7.825,P＜0.05).培养上清中DNA荧光强度,SAA组明显高于SAA +anti-TLR4-Ab组(18.7±0.7与12.9±0.8,t=5.552,P＜0.05).上清中DNA浓度,SAA组也明显高于SAA+anti-TLR4-Ab组[(36.9±1.3) μg/ml和(16.3±0.6) μg/ml,t=14.41,P＜0.05].结论 RA中,SAA可以通过与TLR4受体结合诱导NETs形成.