间充质干细胞调控信号转导因子与转录激活因子3下调小鼠胆管上皮细胞自噬治疗原发性胆汁性肝硬化

目的 探讨PBC小鼠肝内胆管上皮细胞自噬的异常及脐带MSCs(UC-MSCs)对自噬的影响和治疗PBC小鼠的机制.方法 诱导小鼠PBC模型后,随机分为PBC组、MSCs组和Stattic组(信号转导因子和转录激活因子3拮抗剂组,STAT3拮抗剂组),另取对照组.检测小鼠肝脏病理及血清抗丙酮酸脱氢酶复合物E2亚单位(PDG-E2)抗体水平;电镜检测肝内胆管上皮细胞自噬小体;蛋白质印迹法检测STAT3/pSTAT3、Beclin-1表达.培养人肝内胆管上皮细胞(HiBECs)干扰其STAT3,在甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)作用下加入UC-MSCs,检测微管蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)表达.采用t检验和单因素方差分析进行统计分析.结果 与对照组相比,PBC组肝脏可见胆管周围炎症细胞浸润及肉芽肿形成,经MSCs治疗的小鼠肝脏汇管区炎性细胞浸润减少,未见肉芽肿形成.PBC小鼠血清抗PDC-E2抗体高滴度阳性(107±18) ng/ml,高于对照组(42±6) ng/ml (q=6.326,P＜0.01),而MSCs治疗可显著降低其水平(43±4) ng/ml(q=5.801,P＜0.01).电镜结果提示PBC组肝内胆管上皮细胞自噬小体数量[(5.00± 1.29)个]较对照组[(1.75±0.25)个]有增多趋势(q=4.061,P＞0.05).蛋白质印迹法结果提示PBC组Beclin-1的表达(1.80±0.36)明显高于对照组(0.40±0.20)(q=6.757,P＜0.01),MSCs治疗组(0.86±0.06)可显著降低PBC组Beclin-1的水平(q=4.536,P＜0.05),Stattic也有同样作用(0.72±0.03)(q=5.226,P＜0.05).PBC组STAT3(1.80±0.42)(q=5.730,P＜0.05)及pSTAT3(2.04±0.29)(q=6.492,P＜0.01)表达高于对照组(0.50±0.05)、(0.91±0.14),MSCs治疗后STAT3(0.51 ±0.13)(q=5.703,P＜0.01)及pSTAT3(0.76±0.07)(q=7.388,P＜0.01)表达均下降.体外培养HiBECs在干扰STAT3后,MSCs不能明显改变LC3Ⅱ的表达量.结论 PBC小鼠肝内胆管上皮自噬存在异常,MSCs可通过下调STAT3减少其自噬治疗PBC.