Sonic Hedgehog信号通路对内皮细胞凋亡影响的初步研究

目的 初步探讨类风湿关节炎(RA)滑膜组织血管内皮细胞Smo蛋白的表达,并观察肿瘤坏死因子(TNF)-α作用于人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞后Sonic Hedgehog(Shh)信号通路相关分子的表达,及特异性抑制Smo对细胞凋亡的影响.方法 收集4例病情中度活动的RA患者的滑膜组织,同时收集4例外伤或半月板损伤(无关节炎)者滑膜组织作为对照组,免疫组织化学法检测滑膜组织血管内皮细胞Smo蛋白表达情况.予不同浓度TNF-α或联合不同浓度环巴胺处理EA.hy926细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测Shh、Ptch1、Smo、Gli1 mRNA表达.予不同浓度环巴胺处理EA.hy926细胞,加入TNF-α+放线菌素D(ActD)诱导细胞凋亡,采用细胞增殖与毒性试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡情况.两样本均数比较采用t检验,多个样本均数比较采用单因素方差分析.结果 RA患者滑膜血管内皮细胞Smo阳性表达率为(81±23)％,高于对照组阳性表达率(20±17)％(P＜0.05).EA.hy926细胞经TNF-α刺激后,Shh、Smo mRNA表达上调(P＜0.05),Ptch1 mRNA表达无明显变化(P＞0.05),Gli1 mRNA表达下调(P＜0.05).TNF-α与环巴胺共同作用后,Shh、Smo和Gli1 mRNA表达下调(P＜0.05).不同浓度环巴胺(分别为2、4、8μmol/L)作用后的细胞存活率分别为(57±6)％、(44±8)％、(32±5)％,低于TNF-α/ActD组细胞存活率(64±6)％(P＜0.05),细胞凋亡率分别为(12.4±3.3)％、(14.5±2.7)％、(15.7±2.4)％,高于TNF-α/ActD组细胞凋亡率(7.1±1.3)％(P＜0.05).结论 Shh信号通路在RA患者滑膜组织血管内皮细胞中存在激活.特异性抑制Shh信号通路,可以促进内皮细胞凋亡.Shh信号通路可能参与TNF-α作用于内皮细胞后的抗凋亡调控机制.