转化生长因子β1小干扰RNA对小鼠血吸虫病肝纤维化的抑制作用

目的 观察转化生长因子(transforming growth factor β1,TGFβ1)小干扰RNA对小鼠血吸虫病肝纤维化的抑制作用.方法 设计3条针对TGFβ1不同靶位的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA),以及1条无关对照序列(HK),克隆至pGenesil-1质粒中.30只雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、无关序列对照组、序列1治疗组、序列2治疗组、序列3治疗组各5只.建立血吸虫病肝纤维化小鼠模型.测定各组小鼠肝组织羟脯氨酸含量;苏木精-伊红染色与Masson染色观察肝组织病理变化;实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法分别检测肝组织内TGFβ1、母亲信号蛋白同源物(mothers against decapentaplegic homolog,Smad)3、Smad7、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)的mRNA和蛋白质表达水平.计量资料组间比较采用两独立样本t检验.结果 所有治疗组小鼠的肝组织纤维化病理改变较模型组均得到明显改善;序列1治疗组、序列2治疗组和序列3治疗组小鼠肝组织羟脯氨酸含量较模型组均降低(t=14.870、7.097、10.741,均P＜0.01).所有治疗组肝脏内TGFβ1、Smad 3和α-SMA mRNA表达水平(模型组比序列1组=3.235、5.141、10.026,模型组比序列2组t=3.396、5.145、4.951,模型组比序列3组t=3.511、5.429、6.485)与蛋白质表达水平(模型组比序列1组t=8.847、8.044、10.746,模型组比序列2组t=9.709、7.484、10.847,模型组比序列3组t=9.672、8.766、11.508)较模型组均下降(均P＜0.01),而Smad 7的mRNA与蛋白质表达水平较模型组均升高(序列1组比模型组t=11.742、11.211,序列2组比模型组t=14.446、13.736,序列3组比模型组t=10.892、10.908,均P＜0.01).结论 TGFβ1的RNA干扰能有效抑制小鼠血吸虫肝纤维化的发生,其机制可能通过抑制肝内TGFβ1、Smad3和α-SMA的表达,促进Smad 7表达,从而下调肝星状细胞的激活信号,减少细胞内胶原合成,发挥抗血吸虫肝纤维化作用.