沉默糖原合成激酶3β表达对胰腺癌PANC1细胞生长及上皮间质转化的影响

目的 观察沉默糖原合成激酶3β(GSK3β)的表达对胰腺癌PANC1细胞增殖及上皮间质转化(EMT)的影响,探讨其作用机制.方法 设计并合成靶向GSK3β的3个siRNA(siRNA-GSK3β)及阴性对照siRNA (siRNA-NC),分别转染PANC1细胞.通过RT-PCR法检测各组细胞GSK3β mRNA表达量,筛选基因沉默效果最佳的siRNA进行后续实验.采用MTT法检测转染细胞的增殖.采用RT-PCR法检测转染细胞Wnt/β-catenin通路成员Wnt、β-catenin、C-myc、CyclinD1mRNA;Hedgehog通路成员Shh、Smo mRNA;PI3K/Akt/mTOR通路成员PI3K、Akt、mTOR、4E-BP1、p70S6K mRNA以及EMT相关分子Slug、Snail、Twist、E-eadherin、N-cadherin、Vimentin mRNA的表达.结果 转染siRNA-NC的PANC1细胞GSK3β mRNA表达量为1.00 ±0.15,3个转染siRNA-GSK3β的GSK3β mRNA表达量分别为0.25±0.08、0.62 ±0.09、0.70±0.11,转染siRNA-GSK3β细胞均显著低于转染siRNA-NC细胞,差异有统计学意义(P值均＜0.0001).转染后siRNA-GSK3β组细胞的增殖显著低于转染siRNA-NC组细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).转染后siRNA-GSK3β组细胞的Wnt、β-catenin、C-myc、CyclinD1、PI3K、Akt、mTOR、4E-BP1、p70S6K、Slug 、Snail、N-cadherin、Vimentin mRNA表达量分别为0.28 ±0.04、0.47±0.05、0.37±0.05、0.62±0.08、0.22±0.03、0.47±0.06、0.65 ±0.08、0.39±0.04、0.56±0.07、0.33±0.05、0.46±0.07、0.55±0.06、0.38±0.04,均显著低于转染siRNA-NC组细胞,差异有统计学意义(P值均＜0.05);Shh、Smo mRNA表达量分别为1.10±0.13、1.05±0.11,与转染siRNA-NC组细胞的差异无统计学意义;TwistmRNA表达量为0.62±0.08,低于转染siRNA-NC组细胞,E-cadherin mRNA表达量为2.12±0.25,高于转染siRNA-NC组细胞,但差异均无统计学意义.结论 沉默PANC1细胞GSK3β基因表达后能够通过Wnt/β-catenin、PI3K/Akt通路抑制胰腺癌细胞的增殖,并抑制其上皮间质转化过程.