抑制miR-29对胰腺癌PANC1细胞生长、侵袭和转移的影响

目的 观察抑制miR-29对胰腺癌PANC1细胞生长、侵袭和转移能力的影响,探讨其可能机制.方法 以抑制miR-29表达的寡核苷酸(anti-miR-29)及对照寡核苷酸(miR-NC)转染PANC1细胞,构建anti-miR-29-PANC1细胞及miR-NC-PANC1细胞,并采用瞬时转染PUMA-siRNA、E-cadhenn-siRNA或NC-siRNA方法构建共转染的anti-miR-29+PUMA-siRNA-PANC1细胞及anti-miR-29+E-cadherin-siRNA-PANC1细胞.观察各组细胞的克隆形成数,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭能力,划痕试验检测癌细胞迁移能力.采用anti-miR-29-PANC1细胞皮下注射建立裸鼠移植瘤模型,静脉注射建立肺转移模型,以注射PANC1细胞作为对照.观察移植瘤的生长情况及肺转移结节数量,TUNEL法检测移植瘤的细胞凋亡,免疫组织化学法检测移植瘤的PUMA、E-cadherin表达.结果 PANC1、miR-NC-PANC1、anti-miR-29-PANC1组的细胞存活率分别为100％、(96.8±2.8)％、(24.4±3.2)％;细胞克隆形成数为(213 ±36)、(196±28)、(37±6)个/100倍视野;穿膜细胞数为(56.3±9.6)、(49.8±7.3)、(11.2±3.4)个/400倍视野;细胞的迁移距离为(260±48)、(247±46)、(53±7) μm;细胞凋亡率分别为(1.5+0.9)％、(2.6+0.9)％、(22.4+2.8)％,anti-miR-29-PANC1组细胞与其他2组差异均有统计学意义(P值均＜0.05).anti-miR-29+ PUMA-siRNA-PANC1组的细胞存活率为(84.7±10.9)％,细胞凋亡率为(1.3±0.8)％;anti-miR-29+E-cadherin-siRNA-PANC1的穿膜细胞数为(49.7±6.4)个/400倍视野,细胞迁移距离为(182±36) μm,均消除抑制miR-29表达对PANC1细胞所带来的影响(P值均＜0.05).PANC1、anti-miR-29-PANC1细胞移植瘤的体积分别为(3 800±270)、(1 890±160)mm3,细胞凋亡指数为0.93±0.14、8.26±1.15,肺转移结节为(26.4±6.5)、(8.6±2.7)个,PUMA阳性表达率为(7.2±1.6)％、(43.8±7.6)％,E-cadherin阳性表达率为(8.3±3.6)％、(47.4±5.7)％.anti-miR-29-PANC1组移植瘤体积、肺转移结节较对照组显著减小或减少,而细胞凋亡、PUMA及E-cadherin表达显著增加,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 抑制miR-29表达后PANC1细胞的增殖、侵袭、转移能力下降,其机制可能与上调PUMA及E-adherin表达有关.