MicroRNA-429对TGF-β1诱导的大鼠胰腺星状细胞活化和上皮-间质转化的调控作用

目的 探讨miR-429对大鼠胰腺星状细胞(PSCs)活化和上皮-间质转化(EMT)的调控作用.方法 用组织块法提取、培养和分离PSCs,通过免疫荧光染色法检测结蛋白(desmin)、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴定PSCs.取新鲜分离的第2代PSCs,采用脂质体法将miR-429的模拟物(miR-429 mimic)和无意义小分子阴性对照片段(miR-NC)分别转染大鼠PSCs,再用10 μg/L TGF-β1刺激PSCs.采用蛋白质印迹法检测细胞a-SMA、波形蛋白(vimemin)、E-钙黏蛋白(E-cad)及EMT相关蛋白TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3的表达量;实时荧光定量PCR法检测a-SMA、vimentin、E-cad mRNA和miR-429的表达量.结果 培养后PSCs细胞体积变大,伪足发达,细胞间连接减少,脂滴消失,GFAP、desmin表达阳性,α-SMA表达阴性,符合星状细胞的生物学特征.TGF-β1刺激后,大鼠PSCs α-SMA、vimentin、E-cad蛋白的表达量分别为对照组的(1.369 ±0.878)、(1.518±0.041)、(0.549±0.076)倍,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).转染miR-429 mimic且经TGF-β1刺激后,PSCs的α-SMA、vimentin、E-cad mRNA表达量是转染miR-NC组的(0.423±0.038)、(0.652±0.043)、(2.235±0.045)倍,蛋白表达量是(0.683±0.053)、(0.548±0.049)、(1.548±0.038)倍,差异均有统计学意义(P＜0.05或＜0.01);TGF-β/Smad通路的TGF-β1、p-Smad2/3的相对表达量是miR-NC组的(0.459±0.038)、(0.525±0.029)倍,差异均有统计学意义(P ＜0.05或＜0.01).结论 上调miR-429的表达可减弱TGF-β1对大鼠PSCs活化的影响及逆转EMT,其可能的机制是抑制TGF-β1介导的TGF-β/Smad信号转导通路.