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人胰岛新生相关蛋白基因毕赤酵母表达载体的构建

Jian-ping SHA,Yao-ming XUE,Xuan CHEN,Zhan-jun ZENG,Feng-ting ZHUO,Fei-ying HE,Ling WANG,Min WEI

CHINESE JOURNAL OF PANCREATOLOGY（2008）

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Abstract
目的 构建分泌表达具有生物学活性的重组人胰岛新生相关蛋白(rhINGAP)载体毕赤酵母.方法 通过PCR扩增INGAP基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列处,再将融合基因αINGAP重组到表达质粒pPIC9K,Sal Ⅰ酶切线性化重组质粒αINGAP/pPIC9K.电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的 基因INGAP,甲醇诱导rhINGAP的表达,Western blotting鉴定目的 蛋白,ELISA法定量测定其含量.结果 重组表达质粒αINGAP/pPIC9K经酶切获得758bp片段,符合α因子与INGAP片段融合的长度,筛选得到3个阳性转化子,培养上清含有与抗INGAP抗体反应的蛋白.结论 成功构建了分泌INGAP蛋白的毕赤酵母菌株.
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Pichia,Gene expression,Islet neogenesis associated protein
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