AKAP1过表达腺病毒载体构建及其在心肌细胞中的功能初步研究

目的 利用AdEasy腺病毒载体系统构建A激酶锚定蛋白(AKAP)l重组腺病毒载体,初步探索AKAP1在心肌细胞中的功能.方法 以正常小鼠心肌细胞cDNA为模板,利用PCR获取AKAP1基因,构建腺病毒重组质粒pAdEasy-AKAP1.用293A细胞,包装重组腺病毒Ad-AKAP1颗粒,并用荧光蛋白标记法测定其滴度.用Western blot检测重组腺病毒感染原代小鼠心肌细胞和糖尿病心肌病细胞模型后AKAP1、Caspase-3的表达情况,用流式细胞仪检测原代小鼠心肌细胞内ROS生成水平及AKAP1对高糖状态下心肌细胞凋亡的影响.结果 构建了携带AKAP1基因的过表达腺病毒载体,并获得5×1010 pfu/ml的高滴度重组腺病毒.重组腺病毒可感染原代心肌细胞和糖尿病心肌病模型H9c2细胞并介导AKAP1过表达(P＜0.05).与阴性对照组相比,过表达AKAP1可抑制高糖高脂状态下心肌细胞内ROS的生成(P＜0.05),可抑制高糖状态下心肌细胞的凋亡和Caspase-3活化(P＜0.01).结论 过表达AKAP1对高糖高脂状态下的心肌细胞具有潜在保护作用,对心肌功能发挥具有重要作用.其机制可能与AKAP1抑制心肌细胞内ROS生成、抑制Caspase-3活化、抑制细胞凋亡有关.