独活寄生汤抑制炎症介导软骨细胞基质降解的机制研究

目的:探讨独活寄生汤抑制炎症介导软骨细胞基质降解的机制.方法:取4周龄SD大鼠10只,采用机械-Ⅱ型胶原酶消化法建立软骨细胞体外培养体系.在光学显微镜下观察软骨细胞形态,用Ⅱ型胶原免疫组化鉴定软骨细胞.将第2代软骨细胞随机分为空白对照组、模型对照组、中药组,3组均连续干预培养8 h.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测干预后各组软骨细胞培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.采用Western blot检测干预后各组软骨细胞中蛋白多糖1(PGS1)、基质金属蛋白酶(MMP)-13、MMP-9、MMP-3、蛋白聚糖酶(ADAMTS)-4、ADAMTS-5蛋白表达量.结果:①软骨细胞免疫组化鉴定:第2代软骨细胞胞浆呈棕黄色,细胞核不着色,具备软骨细胞的典型特征.②ELISA检测结果:与空白对照组比较,模型对照组IL-1β、TNF-α 含量明显升高(P<0.05);与模型对照组比较,中药组IL-1β、TNF-α 含量均明显下降(P<0.05).③Western blot法检测结果:与空白对照组比较,模型对照组PGS1蛋白表达量明显降低(P<0.01),MMP-13、MMP-9、MMP-3、ADAMTS-4、ADAMTS-5蛋白表达量均明显升高(P<0.01或P<0.05);与模型对照组比较,中药组PGS1蛋白表达量明显升高(P<0.05),MMP-13、MMP-9、MMP-3、ADAMTS-4、ADAMTS-5蛋白表达量均明显降低(P<0.05).结论:独活寄生汤可以通过调控IL-1β、TNF-α、PGS1、MMP-13、MMP-9、MMP-3、ADAMTS-4、ADAMTS-5表达,明显抑制脂多糖介导软骨细胞的炎症反应,改善软骨细胞基质稳态失衡,从而延缓软骨退变.