姜黄素及白藜芦醇对溃疡性结肠炎小鼠巨噬细胞的影响和机制

目的:探讨姜黄素和白藜芦醇对溃疡性结肠炎（UC）小鼠结肠组织巨噬细胞的影响及相关机制。方法:将60只BALB/c小鼠随机平均分为CON组、DSS组、DSS+Cur组、DSS+Res组、Eve+Cur组及Eve+Res组，每组10只。CON组为正常对照组，不进行处理，其余5组均采用3%右旋葡聚糖硫酸钠（DSS）制作UC小鼠模型，即自由饮用3%DSS溶液7 d。DSS组单纯建立模型，DSS+Cur组、DSS+Res组在模型基础上分别每天给予0.4 ml姜黄素、0.4 ml白藜芦醇灌胃。Eve+Cur组在模型基础上每天给予0.4 ml姜黄素灌胃后，再给予0.4 ml mTOR抑制剂Everolimus灌胃。Eve+Res组在模型基础上每天给予0.4 ml白藜芦醇灌胃后，再给予0.4 ml mTOR抑制剂Everolimus灌胃。给药7 d后处死小鼠，分离培养各组小鼠结肠组织巨噬细胞。观察小鼠一般情况并行疾病活动指数（DAI）评分。为观察姜黄素和白藜芦醇对巨噬细胞的影响，采用CCK-8法检测巨噬细胞的增殖活性，流式细胞术检测巨噬细胞凋亡情况，荧光定量PCR和Western blot法检测巨噬细胞中自噬相关因子LC3、Beclin-1和Atg12的mRNA和蛋白表达，ELISA法检测巨噬细胞培养上清中细胞炎症因子白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的水平。为进一步探讨机制，采用ELISA法检测mTOR抑制剂Everolimus对IL-6和TNF-α的影响，采用荧光定量PCR和Western blot法检测巨噬细胞SIRT1/mTOR信号通路相关因子mTOR和SIRT1 mRNA和蛋白的表达。结果:小鼠无死亡。与CON组相比，DSS组、DSS+Cur组和DSS+Res组巨噬细胞的增殖活性均明显增高，凋亡率均明显降低，Atg12、Beclin-1和LC3 mRNA和蛋白的表达水平明显增加（均 P<0.05）；与DSS组相比，DSS+Cur组和DSS+Res组巨噬细胞的增殖活性则显著降低，凋亡率均明显增高，Atg12、Beclin-1和LC3 mRNA和蛋白的表达水平明显降低（均 P<0.05）。与CON组相比，DSS组、DSS+Cur组、DSS+Res组、Eve+Cur组、Eve+Res组小鼠DAI明显升高，巨噬细胞中mTOR和SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低，IL-6和TNF-α的表达水平明显升高（均 P<0.05）；与DSS组相比，DSS+Cur组和DSS+Res组小鼠DAI明显降低，巨噬细胞中mTOR和SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平明显升高，IL-6和TNF-α的表达水平明显降低（均 P<0.05）；而与DSS+Cur组和DSS+Res组相比，Eve+Cur组和Eve+Res组小鼠DAI明显升高，巨噬细胞中mTOR和SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平明显降低，IL-6和TNF-α的表达水平则显著升高（均 P<0.05）。 结论:姜黄素和白藜芦醇能够抑制UC小鼠结肠组织巨噬细胞的增殖，促进其凋亡，抑制炎症反应和自噬的发生，而上述作用可能是通过调控SIRT1/mTOR信号通路实现的。