周期性应力下大鼠髓核细胞中Src蛋白磷酸化及其作用的实验研究

目的 探讨周期性应力下大鼠髓核细胞中Src蛋白的磷酸化水平及其意义. 方法 体外培养SD大鼠髓核细胞,取第2代细胞按1×105/mL的密度接种于玻片上.将玻片随机分成4组(n=8):对照组、加压0.5h组、加压1.0h组、加压2.0h组.加压0.5h组、加压1.0h组、加压2.0h组细胞以0 ～ 200 kPa的压力、0.1Hz的频率分别加压0.5、1.0、2.0h,对照组在无压力环境下培养.应用Western blot检测各组磷酸化Src(pSrc)蛋白的表达.应用PP2[4-氨基-5-(4-氯苯)-7-(t-丁基)吡唑啉酮(3,4-d)嘧啶]抑制Src蛋白,另取细胞玻片,随机分为3组(n=8):对照组、加压6h组、PP2+加压6h组.使用荧光实时定量多聚酶链式反应(RT-PCR)检测3组细胞中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的基因表达.结果 对照组、加压0.5h组、加压1.0h组及加压2.0h组pSrc/磷酸甘油醛脱氢酶灰度比值平均分别为0.244 ±0.013、0.477±0.044、0.530±0.014、0.700±0.063,4组之间比较差异有统计学意义(P＜0.05),除加压0.5h组与加压1.0h组之间外,其余组别之间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).荧光RT-PCR检测3组Ⅱ型胶原和蛋白多糖的基因表达结果显示:对照组表达量最低(1.001±0.039、1.004 ±0.104),加压6h组最高(5.404 ±0.219、2.127 ±0.028),PP2+加压6h组居中(3.038 ±0.237、1.678±0.125),3组之间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 周期性压力能促进髓核细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖的分泌,Src蛋白磷酸化在压力传导中起信号传递作用.