热诱导对8HSE修饰的hTERT启动子转录活性的增强作用

目的:探讨热诱导对8倍重复串联热休克元件(8HSE)修饰的人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)转录活性及靶向性的影响.方法:用PCR法从人结肠癌基因组中克隆hTERTp;将单纯的hTERTp或8HSE修饰的hTERTp重组于双荧光素酶报告载体pGL4.2后,分别与内参质粒pGL4.74(含TK启动子)共转染hTERT高表达的SW480细胞株和hTERT低表达的MKN28细胞株,双荧光素酶法检测hTERTp在37℃及43℃下的转录活性.结果:PCR、酶切和DNA测序表明hTERTp克隆、8HSE合成及载体构建成功.37℃下,单纯hTERTp在SW480细胞中的转录活性明显高于MKN28细胞(P＜0.05),8HSE对hTERTp转录活性无增强作用,且在SW480细胞中8HSE对hTERT转录活性具有抑制作用;43℃下,单纯hTERTp的转录活性在两种细胞中无明显改变(P＞0.05),但与单纯hTERTp比较,8HSE修饰的hTERTp转录活性在SW480细胞中明显增强(P＜0.05),而在MKN28细胞中无明显改变(P＞0.05).结论:热诱导对hTERTp转录活性无明显影响,但对8HSE修饰的hTERTp转录活性有明显的增强作用,且该调控元件靶向于hTERT高表达的肿瘤细胞.