丹参酮ⅡA对软骨细胞去分化影响的研究

目的 研究丹参酮ⅡA在大鼠膝软骨细胞体外培养中对软骨细胞去分化的影响.方法 采用Ⅱ型胶原酶消化法获取2周龄SD大鼠膝关节原代软骨细胞,体外培养传代至P4进行实验.对照组用含10％小牛血清高糖DMEM培养(基础培养液).实验组有3个浓度:100 μg/ml组用基础培养液+100 μg/ml丹参酮ⅡA培养,200 μg/ml组用基础培养液+200 μg/ml丹参酮ⅡA培养,400 μg/ml组用基础培养液+400 μg/ml丹参酮ⅡA培养.培养72 h后,采用CCK-8法检测各组细胞增值情况,光学显微镜观察软骨细胞形态,阿利新蓝染色观察糖胺聚糖(GAG)含量,实时荧光定量PCR检测Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅹ型胶原表达情况.结果 400 μg/ml组肉眼可见的细胞密度低于其他各组,且阿利新蓝染色最浅.培养24 h、48 h、72 h,100 μg/ml组、200 μg/ml组的OD值均大于对照组,而400 μg/ml组OD值均小于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).实验组的Ⅰ型、Ⅹ型胶原mRNA含量明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).400 μg/ml组Ⅱ型胶原mRNA含量低于对照组,100μg/ml组、200 μg/ml组Ⅱ型胶原mRNA含量高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);但100 μg/ml组、200 μg/ml组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 不同浓度的丹参酮ⅡA对去分化软骨细胞作用有所区别,100 μg/ml、200 μg/ml时促进软骨细胞增殖,抑制去分化进程;400 μg/ml时抑制软骨生长活性,细胞基质分泌减少.