雌激素缺乏上调TNF-α促发卵巢切除大鼠骨细胞程序性坏死

目的 探讨雌激素缺乏对去卵巢骨质疏松大鼠骨细胞程序性坏死的影响及其发生机制.方法 60只雌性SD大鼠随机分为Control组(12只)和OVX组(48只),分别行假手术或OVX术;再将48只OVX大鼠分为OVX+ vehicle、OVX+ Nec-1、OVX+ Z-VAD和OVX+E2组,每组12只.Micro-CT扫描评价胫骨近端骨量改变;免疫组化法测定骨细胞TNF-α、RIP1、RIP3的表达情况,并计算各组阳性细胞百分率;用透射电镜鉴定细胞形态学变化;Western blot检测程序性坏死下游信号通路蛋白MLKL、Drp1的表达情况.结果 OVX+ vehicle组大鼠胫骨近端出现明显的骨量丢失,即OVX+vehicle组Tb.Th、BV/TV、Tb.N小于Control组(P＜0.01);而OVX+vehicle组Tb.Sp大于Control组(P＜0.01).TNF-α、RIP1、RIP3蛋白在骨细胞胞浆中均有表达;在OVX+ vehicle组,TNF-α、RIP1、RIP3阳性骨细胞百分率较Control组显著增多(P＜0.01),在OVX+ vehicle 组可见大量坏死样结构的骨细胞.应用Nec-1治疗后可有效抑制RIP1蛋白表达,而Z-VAD对RIP1、RIP3蛋白表达无影响,在OVX+ Nec-1组未见到坏死样结构的骨细胞.在OVX+ vehicle组,Western blot结果显示MLKL、Drp1蛋白表达较Control组显著增多(P＜0.01),应用Nec-1治疗后可有效抑制MLKL、Drp1蛋白表达,而Z-VAD对MLKL、Drp1蛋白表达无影响.结论 雌激素缺乏可能是通过上调TNF-α表达而促发骨细胞发生程序性坏死的,MLKL、Drp1可能是骨细胞程序性坏死的下游关键信号分子.