乏氧与Notch通路在骨肉瘤表达及耐药作用的研究

[目的]检测乏氧和Notch通路相关蛋白在人骨肉瘤标本组织中的表达情况,并采用MG-63细胞实验研究多种相关蛋白参与骨肉瘤化疗的耐药机制.[方法]免疫组织化学方法检测HIF-1α、Notch1、MDR1/P-gp、MRP1蛋白在骨肉瘤及骨软骨瘤临床标本组织中表达情况.采用Notch siRNA转染乏氧环境中的MG-63细胞,Western blot检测相关蛋白表达情况,MTT方法检测细胞化疗药物敏感性的影响.[结果]骨肉瘤组织中HIF-1α、Notch1、MDR1/P-gp、MRP1蛋白的阳性表达率均显著高于骨软骨瘤组织,差异有统计学意义(P＜0.05).HIF-1α与Notch1之间,Notch1与MRP1之间,以及HIF-1α与MRP1之间存在显著正相关(P＜0.05),而MDR1/P-gp与其他三种蛋白表达无相关性(P＞0.05).乏氧状态下MG-63细胞对顺铂、阿霉素、甲氨蝶呤或异环磷酰胺的半数抑制浓度IC50显著高于常氧状态,差异有统计学意义(P＜0.05).而乏氧环境Notch1 siRNA转染的MG-63细胞对顺铂、阿霉素、甲氨蝶呤或异环磷酰胺的半数抑制浓度IC50显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05),且Notch1-ICN和MRP1蛋白表达水平明显降低.[结论]骨肉瘤组织中HIF-1α、Notch1、MDR1/P-gp、MRP1蛋白的阳性表达率高于骨软骨瘤.乏氧条件下MG-63细胞对多种化疗药物呈耐药性,阻断Notch1可逆转乏氧诱导的骨肉瘤细胞多药耐药,提示Notch1是治疗骨肉瘤耐药的有效分子靶点.