利用条件性重编程细胞技术构建前列腺癌原代细胞库

目的:利用条件性重编程细胞(CRC)技术培养人源性前列腺癌细胞，为前列腺癌体外实验研究建立个体化原代细胞库。方法:2019年1—4月共获取3例新鲜的前列腺癌病理组织标本，将标本分为2份，一份经术中快速冰冻病理检查确定为癌组织；另一份用0.25% EDTA酶消化为分散的悬浮单个的癌细胞，利用CRC技术对癌细胞进行培养。培养方法：将原代细胞与经30 Gy照射的3T3-J2小鼠成纤维细胞共培养于条件性培养基中，观察癌细胞克隆团生长情况。使用差异性消化对原代细胞进行传代：先用0.25% EDTA胰酶消化1 min去除饲养层细胞，PBS清洗后再用0.25% EDTA胰酶消化原代细胞。待癌细胞稳定后，通过免疫荧光、免疫组化染色、免疫印迹和荧光原位杂交技术等实验，验证所培养的癌细胞性质。结果:体外利用CRC技术建立3例前列腺癌原代细胞株，细胞培养约15 d建系成功，并可持续稳定传代。细胞鉴定结果显示，所培养的细胞均表达AR、CK5、CK18和P504s，同时也弱表达PSA。荧光原位杂交技术显示细胞出现≥1.6%的TMPRSS2/ERG基因融合，这些现象符合前列腺癌的细胞特征。结论:利用CRC技术能稳定地体外持续培养前列腺癌原代细胞。