人端粒酶逆转录酶基因修饰内皮祖细胞移植对大鼠肢体缺血的实验研究

目的:探讨人端粒酶反转录酶(hTERT)修饰的内皮祖细胞(EPCs)移植对SD大鼠缺血肢体治疗机制和规律.方法:EPCs原代培养及鉴定后,脂质体法将PLXSN-hTERT稳定转染EPCs,Western blot鉴定外源hTERT基因在内皮祖细胞中的表达.64只雄性SD大鼠随机单位组设计分为4组:缺血对照组(A组)、hTERT治疗组(B组)、EPCs治疗组(C组)、转染hTERT基因的EPCs治疗组(D组),每组16只.结扎大鼠左股动脉及分支,构建后肢缺血模型.于内收肌和腓肠肌共注射5点,每点注射60μL,A组注射300μL培养液,B组注射DNA-脂质体复合物,C组注射4×106个EPCs,D组注射4×106个含hTERT基因的EPCs.于移植后4周行动脉造影,采用RT-PCR检测hTERT基因的体内表达,评价血管新生情况;荧光显微镜观察PKH-26标记的EPCs存活情况.结果:64只大鼠均造模成功.Western blot结果显示转染人hTERT基因的人内皮祖细胞体外能表达hTERT.移植后4周动脉造影显示,A组大鼠股动脉及其分支均未显影,B组和C组可见中等量新生血管,两组效果相似,C组可见有大量新生血管及丰富的侧枝循环建立.B组和C组均较A组新生血管数量增加,D组可进一步增强疗效PKH-26阳性细胞数:ABCD四组分别为[(0±0.00),(0±0.00),(27.46±5.48),(54.37±8.34)]个/HP;P<0.05.RT-PCR检测hTERT基因的体内表达,D组和B组均有扩增,D组hTERT mRNA相对含量高于B组.D组和B组hTERT mRNA相对含量分别为(0.89±0.06,0.29±0.04;P<0.05).结论:通过人端粒酶反转录酶(hTERT)修饰的内皮祖细胞(EPCs)移植治疗大鼠肢体缺血,可以让hTERT基因稳定有效持续的表达,其效果优于直接基因注射.