柯萨奇病毒腺病毒受体在肺癌中的表达和意义

目的:明确柯萨奇病毒腺病毒受体(CAR)在正常肺组织、癌旁组织及肺癌组织中的表达情况以及在体外CAR失表达对人肺鳞状细胞癌NCI-H520细胞增殖与侵袭迁移的影响.方法:收集肺癌手术切除新鲜标本100例及其对应的癌旁组织和正常肺组织,应用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR法检测CAR蛋白和mRNA的表达情况;在体外运用RNAi技术建立稳定的低表达CAR的人肺鳞状细胞癌NCI-H520细胞系,用平板克隆形成实验和Transwell侵袭及迁移实验观察RNAi抑制CAR基因表达对NCI-H520肺癌细胞增殖与侵袭迁移的影响,并通过建立动物模型动态观察瘤体的生长.结果:免疫组织化学结果显示,CAR阳性率为48%.Western blot法检测CAR蛋白和RT-PCR检测CAR mRNA在肺癌组织中明显高于正常肺组织和癌旁组织.筛选得到三组CAR基因表达受到抑制的NCI-H520稳定细胞系.半定量RT-PCR和Western blot结果显示,三组稳定细胞系中CAR mRNA和蛋白质表达均有不同程度的下降,其中shRNA-2抑制作用最强.平板克隆形成实验显示,shRNA-2抑制CAR基因表达后,NCI-H520细胞的增殖能力有所下降(P>0.05),Transwell侵袭及迁移实验显示,NCI-H520细胞侵袭迁移能力明显下降(P<0.05).动物模型结果显示,抑制CAR的表达,则动物体内移植瘤的生长就会缓慢.结论:CAR与肺癌形成和进展有关,并能够促进肺癌细胞的侵袭和迁移活动.裸鼠肺癌移植瘤模型构建成功,为以后肺癌的研究奠定基础.利用RNAi有效抑制了CAR基因的表达,并抑制NCI-H520细胞在裸鼠体内瘤体的生长,CAR有望成为肺癌基因治疗的靶点之一.