过表达TRAIL联合特异性沉默Eag1的协同抗骨肉瘤作用

目的：检测过表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( TNF-related apoptosis-inducing ligand， TRAIL )联合特异性沉默 Ether à go-go 1( Eag 1)基因对骨肉瘤的影响。方法分别构建名为 Ad5. eGFP、CRAd5. siEag、CRAd5. TRAIL 和 CRAd5. TRAIL / siEag1的腺病毒载体并检测其抗骨肉瘤的作用。结果Ad5. eGFP 对 MG-63细胞中的 Eag 1和 TRAIL 表达无明显影响，CRAd5. siEag 仅可抑制 Eag 1的表达，CRAd5. TRAIL 仅可过表达 TRAIL，而 CRAd5. TRAIL / siEag1既能沉默 Eag 1又能过表达 TRAIL。细胞增殖实验结果显示：CRAd5. TRAIL / siEag1比 Ad5. eGFP、CRAd5. TRAIL 或 CRAd5. siEag1能更有效地抑制骨肉瘤细胞增殖。同时，对人成骨细胞 hFOB 1.19无明显细胞毒性。CRAd5. TRAIL / siEag1组 Caspase-3/7活性为(39693.33±1922.96) RLU，Ad5. eGFP、CRAd5. siEag1和 CRAd5. TRAIL 组 Caspase-3/7活性分别为：(2832.83±375.99)、(3242.50±329.97)和(15583.17±698.54) RLU。统计学分析显示 CRAd5. TRAIL / siEag1组 Caspase-3/7活性明显高于其它三组( P＜0.001)。此外，CRAd5. TRAIL / siEag1还可有效地诱导 MG-63细胞中 PARP 裂解物表达。局部注射第8天，CRAd5. TRAIL / siEag1组裸鼠肿瘤的体积为(231.19±25.96) mm3，Ad5. eGFP、CRAd5. siEag1和 CRAd5. TRAIL 组裸鼠肿瘤体积分别为：(504.68±102.32)、(365.85±47.60)和(355.48±35.34) mm3，CRAd5. TRAIL 组裸鼠肿瘤体积与其它三组相比差异均有统计学意义( P＜0.05)。第10、12和14天，CRAd5. TRAIL / siEag1组裸鼠肿瘤的体积分别为：(367.82±39.52)、(470.18±60.11)和(631.52±61.22) mm3，Ad5. eGFP、CRAd5. siEag1和 CRAd5. TRAIL 组裸鼠肿瘤体积分别为：(826.57±130.60)、(1284.69±243.50)和(1762.06±180.36) mm3，(552.12±64.39)、(721.82±108.20)和( 949.20±124.70) mm3，(524.03±43.47)、(653.54±56.22)、(896.44±93.64) mm3。与其它三组相比，CRAd5. TRAIL / siEag1可更有效地抑制裸鼠骨肉瘤生长。TUNEL 实验结果显示：CRAd5.TRAIL / siEag1的凋亡指数为(27.33±2.07)%，而Ad5. eGFP、CRAd5. siEag1和 CRAd5. TRAIL 组的凋亡指数分别为(2.68±0.64)%，(8.49±1.06)% 和 (15.99±1.94)%，CRAd5. TRAIL / siEag1组与其它三组相比可有效地促进骨肉瘤凋亡( P＜0.001)。结论过表达 TRAIL联合特异性沉默 Eag 1基因可产生协同抗骨肉瘤作用，因此 CRAd5. TRAIL / siEag1腺病毒载体可作为一个有效的骨肉瘤基因治疗工具。