聚氯乙烯材料表面白色念珠菌-表皮葡萄球菌混合生物膜结构观察

目的 建立聚氯乙烯(polyvinyl chloride,PVC)材料表面白色念珠菌-表皮葡萄球菌混合生物膜体外模型,观察混合生物膜的形成与微观结构.方法 取表皮葡萄球菌(ATCC35984)与白色念珠菌(ATCC10231),分别制备浓度为1× 106 CFU/mL的悬液并混合后,与直径0.5 cm PVC膜在胰蛋白胨大豆肉汤(tryptic soy broth,TSB)培养基中共培养形成混合生物膜(实验组).培养2、6、12、24、48、72h时取PVC膜,激光共聚焦显微镜检测生物膜厚度、单位视野菌落数,并于48 h时测量生物膜内活菌百分比、三维重建PVC膜表面生物膜图像;扫描电镜观察各时间点混合生物膜结构.以单纯PVC膜置于TSB培养基中培养作为对照组.结果 对照组各时间点PVC材料表面无病原菌黏附.实验组激光共聚焦显微镜观察示,培养6h时可见菌落及生物膜形成,随时间延长均逐渐增加,24 h时菌落达高峰,48 h时生物膜厚度达峰值.实验组PVC膜表面菌落数比较,2、6、24 h间以及2、6h与48、72 h间比较差异有统计学意义(P＜0.05),24、48、72 h间比较差异无统计学意义(P＞0.05);生物膜厚度除48、72 h间比较差异无统计学意义外(P＞0.05),其余各时间点间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).培养48 h时,混合生物膜外层活菌百分比明显高于内层及中间层(P＜0.05).三维重建显示混合生物膜表面凹凸不平,突起部分活菌数量较多.扫描电镜观察示,实验组随培养时间增加,PVC膜表面白色念珠菌由孢子状逐渐伸长出现假丝状及菌丝状,表皮葡萄球菌黏附于白色念珠菌周围,逐渐形成复杂的多层次网状混合生物膜.结论 白色念珠菌-葡萄球菌混合培养可在PVC材料表面形成结构复杂的混合生物膜,激光共聚焦显微镜、扫描电镜与三维图像重建技术的结合是研究混合生物膜的理想方法.