维生素C对TNF-α及血清剥夺诱导的人髓核细胞凋亡的作用

目的 探讨维生素C (Vitamin C,Vit C)在TNF-a及血清剥夺诱导人椎间盘髓核细胞凋亡中的作用及机制.方法 取脊柱矫形手术患者的髓核组织,消化法获得正常髓核细胞,取第3代细胞按不同处理因素分为VitC作用组(A组)、TNF-α诱导组(B组)和血清剥夺组(C组),每组再分为以下亚组:A组分为A1组(基础培养液)、A2组(100 μg/mL VitC)、A3组(200 μg/mL Vit C);B组分为B0组(对照组)、B1组(100 ng/mL TNF-a)、B2组(100 μg/mL Vit C+100 ng/mL TNF-α)、B3组(200 μg/mL Vit C+100 ng/mL TNF-α);C组分为C0组(对照组)、C1组(FBS浓度由8％降低为2％)、C2组(2％FBS+100 μg/mL VitC)、C3组(2％FBS+200 μg/mL Vit C).各组作用24h后,采用流式细胞术检测各组膜联蛋白Ⅴ、碘化丙啶双染后髓核细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测p53(基因编码相对分子质量为53×103的蛋白质)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Sox9和糖胺多糖(Aggrecan)mRNA表达.结果 A组:与A1组比较,A2、A3组的VitC均能降低髓核细胞凋亡及p53、FAS、Caspase 3 mRNA表达(P＜0.05),但A2、A3组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);A2、A3组的Vit C可促进髓核细胞Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Aggrecan、Sox9 mRNA表达,且A3组促进作用显著大于A2组(P＜0.05).B组:与B0组比较,B1组TNF-α促进了髓核细胞凋亡,增加了髓核细胞p53、FAS、Caspase 3 mRNA表达(P＜0.05);与B1组比较,B3组的Vit C能降低髓核细胞凋亡及p53、FAS、Caspase 3 mRNA表达,而B2组的VitC则增加其凋亡及p53、FAS、Caspase 3 mRNA表达,差异均有统计学意义(P＜0.05).C组:与C0组比较,C1组2％FBS能诱导髓核细胞凋亡,但降低了髓核细胞p53、FAS、Caspase 3 mRNA表达(P＜0.05);与C1组比较,C3组的VitC能降低髓核细胞凋亡及p53、FAS、Caspase 3 mRNA表达,而C2组的VitC则增加其凋亡及p53、FAS mRNA表达,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Vit C能延缓或降低髓核细胞凋亡、促进细胞外基质合成与分泌,200 μg/mL Vit C可延缓或降低100 ng/mL TNF-a和2％FBS诱导的凋亡,而100 μg/mL Vit C则促进其诱导的凋亡.