Podocalyxin基因沉默对足细胞结构和功能的影响

目的:探讨siRNA敲低podocalyxin(PODXL、足糖萼)基因对足细胞结构、功能的影响及机制. 方法:采用RPMI 1640培养基,在33℃培养永生化小鼠足细胞系,分化成熟后分为5组:空白组(Vehicle)、模拟组(Mock)、阴性对照组(Sh-nc)、siRNA-PODXL组(Si)、ezrin抑制组(NSC305787).用鬼笔环肽行足细胞骨架蛋白F-actin染色,共聚焦荧光倒置显微镜下观察细胞骨架排列;划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞的迁移能力;流式细胞仪检测足细胞凋亡;Western印迹法和RT-qPCR检测PODXL和p-ezrin表达水平. 结果:(1)共聚焦荧光倒置显微镜下观察结果显示:空白组足细胞骨架肌纤维排列有序,荧光显示清晰;Si组、ezrin抑制组足细胞微丝解聚、胞体回缩,骨架排列紊乱,荧光明显模糊减弱,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);Mock及Sh-nc组与空白组无明显差异;(2)划痕愈合实验、Transwell实验结果显示:PODXL敲低、抑制ezrin磷酸化后足细胞迁移较其他三组减慢;(3)流式细胞仪结果显示:PODXL敲低、抑制ezrin磷酸化后足细胞凋亡率增加;(4) western印迹法和RT-qPCR检测结果显示:与正常组相比,Si组PODXL表达明显下调,同时p-ezrin表达下调,Mock及Sh-nc组与空白组无明显差异;(5) G-LISA法检测细胞中RhoA活性,结果显示:Si组、ezrin抑制组与正常组相比RhoA活性明显下降,Mock及Sh-nc组与空白组无明显差异. 结论:敲低PODXL基因或抑制ezrin磷酸化后,p-ezrin表达下调、RhoA活性降低,导致足细胞骨架结构紊乱、促进足细胞凋亡.表明PODXL基因敲低后引起足细胞损伤可能与p-ezrin、RhoA信号通路有关.