不同培养基对皮肤来源的成纤维细胞增殖、衰老及胶原蛋白分泌的影响

Wen-jun LA,Xiao-fa LIN,Wei JIANG,Yan WANG, Wei-min YIN, Jia-huan LIN,Feng LIN

Chinese Journal of Aesthetic Medicine(2017)

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摘要
目的:探讨不同培养基组成对皮肤成纤维细胞的增殖、衰老及胶原蛋白分泌的影响.方法:采用两步酶消化法从健康人耳后皮肤中获得成纤维细胞,依据培养基种类不同分为A组(FM无血清培养基)、B组(DMEM+10%FBS)、C组(RPMI-1640+10%FBS)、D组(DMEM+F12(1:1)+10%FBS),采用MTT法、细胞划痕实验、酶联免疫吸附实验、β-半乳糖苷酶试验、软琼脂克隆形成试验比较不同培养基对细胞增殖、迁移、胶原分泌、老化、变异的影响.结果:采用酶消化法在2d~4d内即可从组织块中获得大量成纤维细胞;其中B、D组较A、C组细胞增殖较快,且趋势与MTT细胞增殖相同;划痕实验显示B、D组较A、C组向缺损部位迁移更为明显;此外,D组胶原蛋白分泌量高于其余三组(P<0.05),且连续传代30次后,细胞无明显衰老及瘤变迹象.结论:两步酶消化法可快速高效的从人组织块中获得成纤维细胞,且采用DMEM+F12(1:1)完全培养基有利于促进细胞增殖、分泌胶原蛋白及延缓细胞衰老.
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关键词
fibroblasts,culture medium,collagen,cell proliferation,primary culture
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