hTNFα／CHO基因工程细胞的构建及其分泌蛋白功能的检定

目的：构建能够持续分泌人肿瘤坏死因子（ hTNFα）的中国仓鼠卵巢细胞（ CHO）基因工程细胞hTNFα／CHO细胞系，并且观察其分泌功能的变化。方法应用载体GV141构建携带hTNF基因表达的质粒；采用脂质体转染法，经G418筛选稳定转染细胞株；通过Real-Time PCR鉴定其基因表达，采用ELIAS法鉴定其蛋白分泌情况。结果经序列比对，证明GV141-hTNFα表达载体构建成功，Real-Time PCR证明转染细胞系包含hTNFα目的基因，ELIAS鉴定结果证明该细胞系可以在一定代数稳定持续内分泌hTNFα。结论构建的hTNFα／CHO细胞系可以在一定代数内稳定持续地分泌人肿瘤坏死因子。