在高脂条件下足细胞特异性PTEN敲进对肾脏有保护作用

目的 观察在高脂饮食(HFD)条件下体内足细胞特异性过表达PTEN对小鼠肾脏的作用,并探讨体外氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激环境中足细胞内PTEN调控清道夫受体A(SR-A)介导的脂质摄取的机制.方法 构建足细胞特异性PTEN敲进(PPKI)转基因小鼠,HFD诱导转基因小鼠肾损伤.小鼠分为正常饮食(ND)+对照(Ctrl)组、ND+PPKI组、HFD+Ctrl组、HFD+PPKI组.于饮食干预后第24周,检测4组小鼠临床生化指标,包括血肌酐、尿白蛋白排泄(尿白蛋白与肌酐比)等;油红O染色和肾皮质胆固醇定量观察肾脂质积聚情况;PAS染色和电镜评估肾小球硬化情况.体外ox-LDL刺激诱导足细胞损伤.Western印迹检测siRNA沉默YAP表达(si-YAP)后ox-LDL诱导足细胞SR-A蛋白表达的变化,及在siRNA沉默PTEN表达(si-PTEN)、PTEN抑制剂(Bpv-PTEN)、腺病毒过表达PTEN(ad-PTEN)的作用下ox-LDL诱导足细胞YAP磷酸化的变化. 结果 与ND+Ctrl组相比,HFD+Ctrl组小鼠的血肌酐、尿白蛋白排泄水平上升,足细胞SR-A表达及肾内脂质含量明显增加,系膜基质增生,足突融合增加及基底膜增厚(均P＜ 0.05);而与HFD+Ctrl组相比,HFD+PPKI组小鼠上述肾损伤指标均减轻(均P＜ 0.05).体外ox-LDL刺激能上调足细胞SR-A表达,与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);敲除YAP可使ox-LDL诱导的SR-A表达下降,si-YAP+ox-LDL组SR-A表达低于ox-LDL组(P＜0.05).在ox-LDL刺激下足细胞内磷酸化(p)-YAP表达增加,与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);上调PTEN的表达可抑制ox-LDL诱导的p-YAP表达上调,ad-PTEN+ox-LDL组p-YAP表达低于ox-LDL组(P＜0.05);而敲除PTEN或抑制PTEN磷酸酶活性均能进一步上调ox-LDL诱导的p-YAP的表达,si-PTEN+ox-LDL组和Bpv-PTEN+ox-LDL组p-YAP表达均高于ox-LDL组(均P＜0.05).结论 足细胞特异性过表达tPTEN对脂质肾损伤有保护作用,且PTEN可能通过使p-YAP去磷酸化进而抑制SR-A介导的脂质摄取缓解ox-LDL诱导的足细胞损伤.