肾上腺髓质素通过调控Rho GTPases促进足细胞细胞间接触的形成

目的 通过观察肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)对足细胞细胞黏附分子和肌动蛋白相关蛋白的调控作用及相关机制,探讨AM对足细胞细胞间接触形成的影响.方法 将温度敏感型小鼠足细胞株分为对照组、AM处理组(10-7 mol/L)及AM联合蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89(10-6mol/L)处理组,并以腺苷酸环化酶激活剂福司柯林(forskolin)处理组(10-5 mol/L)作为阳性对照组.作用12h后,经免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜,观察细胞黏附分子和肌动蛋白相关蛋白的表达改变,并经Western印迹法检测其蛋白表达水平;采用谷胱甘肽巯基转移酶-拉下实验(GST-pull down assay)法检测Rho GTPases酶活性变化,Western印迹法检测其蛋白表达水平.结果 经AM作用12 h后,细胞黏附分子、肌动蛋白相关蛋白以及肌动蛋白F-actin均向细胞间接触集聚表达,该效应与forskolin作用一致,且可被H89阻断,但其蛋白水平均未见明显改变(P＞0.05).AM可分别上调RhoA、Rac1及Cdc 42的酶活性水平(P＜0.05),该作用被H89部分阻断,其总蛋白水平未见明显变化(P＞0.05).结论 AM可促进足细胞细胞间接触的形成,其作用机制可能与AM上调RhoA、Rac1和Cdc42酶活性,从而促进细胞黏附分子、肌动蛋白相关蛋白及肌动蛋白的重排密切相关,该效应部分由cAMP-PKA信号通路介导.