镁通过L型钙通道α1C和β3亚基抑制高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的：探讨L型钙通道（L?type calcium channel ，LTCC）α1C、β3亚基在镁抑制高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）钙化中的作用。方法体外原代培养大鼠胸主动脉VSMC和血管环，用β?甘油磷酸盐（β?glycerophosphate ，β?GP）诱导钙化。将细胞、血管环分别分为4组培养7 d：正常对照组、高磷组（10 mmol/Lβ?GP）、镁干扰组（10 mmol/Lβ?GP+3 mmol/L MgSO4）、镁通道抑制剂（2?APB）组（10 mmol/Lβ?GP+3 mmol/L MgSO4+0.1 mmol/L 2?APB）。采用茜素红染色、硝酸银染色分别检测各组VSMC、血管环的钙盐沉积情况，且用邻甲酚酞络合酮比色法检测钙含量。反转录PCR、Western印迹检测VSMC中LTCCα1C、β3亚基，Runx2的基因和蛋白表达。免疫组织化检测各组血管环中Runx2蛋白表达。ELISA测定VSMC碱性磷酸酶（ALP）活性，荧光探针法测定细胞内钙离子浓度。结果与正常对照组比较，高磷组VSMC钙含量，ALP活性，LTCCα1C、LTCCβ3和Runx2 mRNA和蛋白的表达，胞内钙离子浓度均增加（均P＜0.05）；与高磷组比较，镁干扰组VSMC钙含量，ALP活性，LTCCα1C、LTCCβ3和Runx2 mRNA和蛋白的表达，钙离子浓度均降低（均P＜0.05）。镁干扰组血管环组织钙含量和Runx2蛋白表达均低于高磷组（均P＜0.05）。镁通道抑制剂组以上各项目与高磷组比较差异均无统计学意义。结论镁可以抑制高磷诱导的大鼠血管钙化，其可能是通过抑制LTCCα1C和β3亚基表达，阻滞VSMC钙离子内流，降低Runx2的表达，从而抑制VSMC发生表型转化实现的。