微小RNA-382在肾小管间质纤维化发病中的作用及其分子机制

目的 研究微小RNA-382(miR-382)在肾小管间质纤维化(TIF)发病中的作用及相关机制.方法 通过抑制miR-382的表达,观察其丰度对人近端肾小管上皮细胞(HK2)转分化的影响,并验证miR-382与其预测靶基因热休克蛋白60(HSPD1)的互补配对关系.建立小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型,经尾静脉注射锁核苷酸(LAN)修饰的anti-miR-382,观察抑制miR-382表达对梗阻侧肾小管间质病变及肾组织硫氧还原蛋白(Trx)水平的影响.收集有和无明显TIF的IgA肾病(IgAN)患者肾穿刺标本各6例,原位杂交和免疫组化法检查TIF程度及抗氧化应激水平,分析其与miR-382/HSPD1表达的相关性.结果 体外荧光素酶报告基因检测和定点突变实验结果证实HSPD1为新的miR-382对应的直接靶基因.TGF-β1诱导HK2细胞发生转分化,与对照组相比,TGF组miR-382表达水平显著上调[(6.54±0.96)比(1.12±0.26),P＜ 0.05];阻断miR-382可使TGF-β1诱导的上皮转分化部分被逆转.体内实验结果表明,UUO模型组小鼠发生明显TIF病变,与假手术组相比,模型组miR-382丰度明显上调[(6.89±2.47)比(1.00±0.42),P＜ 0.05],HSPD1和Trx蛋白表达水平明显下调.10 mg/kg LNA-anti-miR-382干预组miR-382表达下调,梗阻侧肾组织TIF程度减轻,HSPD1和Trx的蛋白表达水平上调(均P＜ 0.05).IgAN患者肾组织检查结果提示,与无纤维化组相比,纤维化组肾组织miR-382丰度明显上调,HSPD1蛋白表达水平则明显降低(均P＜0.05).结论 miR-382在人类及小鼠TIF发病中起重要作用,HSPD1是miR-382的直接靶基因.HSPD1表达下调导致相应的抗氧化应激能力减弱可能是miR-382参与TIF的机制之一.