活性维生素D通过调节糖尿病肾病大鼠巨噬细胞M1及M2表型活化防治足细胞损伤

目的 探讨活性维生素D(VD)能否通过调节肾组织巨噬细胞M1及M2表型活化从而防治糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞损伤.方法 利用腹腔注射链脲菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型.将SD雄性大鼠按随机数字表法分为4组:对照组1(NC-1组,n=8)、对照组2(NC-2组,n=8,对照+骨化三醇0.1μg·kg-1·d-1灌胃)、DN组(n=24)、DN+VD干预组(VD组,n=24,DN+骨化三醇0.1 μg· kg-1·d-1灌胃),定期检测血糖、体质量,收集尿标本,分别于干预后8周、14周、18周末处死动物,检测Scr、BUN和尿蛋白变化;PAS染色观察肾脏病理改变;免疫组化法检测肾组织CD68+巨噬细胞浸润数量;Western印迹法检测nephrin、podocin、CD68以及M1巨噬细胞特异性标志物诱导型氮氧化物合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和M2巨噬细胞特异性标志物CD163、精氨酸酶1(Arg-1)、甘露糖受体(MR)表达.结果 (1)与两对照组相比,DN组Scr、BUN、24 h尿蛋白量及肾小球系膜基质增生程度显著增加(P＜0.05),podocin、nephrin蛋白表达下降(P＜0.05).VD干预后能明显改善上述病理现象(均P＜0.05).(2)与两对照组相比,DN组肾组织CD68+巨噬细胞浸润数量明显增加,呈时间依赖性.VD干预后能显著减少CD68+巨噬细胞浸润数量(P＜0.05).(3)进一步确定肾组织巨噬细胞M1、M2活化表型发现,8周、14周、18周末DN组iNOS、TNF-α蛋白表达较对照组显著升高(均P＜0.05),VD干预后能明显抑制同期DN肾组织iNOS、TNF-α表达(均P＜0.05);8周、14周末VD组CD163、Arg-1、MR蛋白表达与DN组相比差异无统计学意义(均P＞0.05),而18周末VD组CD163、Arg-1、MR蛋白表达较DN组显著升高(均P＜0.05),CD 163/CD68蛋白表达比例亦显著增加(P＜0.05).(4)相关分析显示,M1标志物iNOS与nephrin、podocin蛋白表达均呈负相关(r=-0.707,P＜0.01;r=-0.712,P＜0.01);M2标志物CD163与nephrin、podocin蛋白表达均呈正相关(r=0.627,P＜ 0.01;r=0.613,P＜ 0.01).结论 活性维生素D具有调节巨噬细胞表型活化的能力,通过抑制巨噬细胞M1型活化并增强M2型活化,进而发挥足细胞保护作用.