早期自噬激活抑制醛固酮诱导的足细胞损伤

目的 探讨早期自噬激活对醛固酮诱导足细胞损伤的保护作用.方法 体外培养永生性小鼠足细胞系,分别在醛固酮刺激6、12、24、48 h后应用Annexin V结合流式细胞术检测足细胞凋亡；透射电子显微镜检测足细胞凋亡小体和自噬小体；Western印迹检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、凋亡相关蛋白caspase-3及足细胞分子nephrin的表达；实时定量PCR检测自噬相关基因Beclin-1的表达.结果 醛固酮(10-7mol/L)呈时间依赖性诱导足细胞凋亡,下调nephrin表达.与对照组比较,醛固酮刺激24 h足细胞凋亡增加26.5％(P＜0.05),nephrin表达降低28.0％(P＜0.05).醛固酮(10-7mol/L)呈时间依赖性诱导足细胞发生自噬.与对照组比较,醛固酮刺激6h自噬相关基因Beclin-1表达显著上调(P＜0.05)；醛固酮刺激12h自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加(P＜0.05).应用3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制自噬后,醛固酮诱导足细凋亡的时间提前至刺激后12h.3-MA处理组与醛固酮刺激24 h比较,足细胞凋亡增加39.0％ (P＜ 0.05),nephrin表达进一步下调19.5％(P＜ 0.05),并且caspase-3明显活化(P＜0.05).结论 醛固酮可诱导足细胞发生自噬和凋亡；醛固酮刺激12h时自噬明显活化；刺激24 h时凋亡显著增加.早期自噬激活可抑制醛固酮诱导的足细胞凋亡,并减轻足细胞损伤.以足细胞自噬为靶点可能成为治疗肾小球疾病的新研究方向.