多囊蛋白1氨基段融合蛋白对肾小球系膜细胞细胞外基质及其降解基因表达的影响

目的 研究多囊蛋白-1氨基段(PC-1NF)融合蛋白对大鼠肾小球系膜细胞(RMC)Ⅳ型胶原及其降解调控基因表达的影响.方法 用实时荧光定量RT-PCR法检测PC-1NF融合蛋白对RMC Ⅳ型胶原和细胞外基质(ECM)降解调控基因基质金属蛋白酶、金属蛋白酶1组织抑制剂(MMP-2、TIMP-1)表达的作用.ELISA方法检测培养的细胞上清液中Ⅳ型胶原含量的变化.免疫细胞化学方法观察融合蛋白对细胞核因子c-jun和c-fos表达的影响.Western印迹检测融合蛋白对蛋白激酶C(PKC)-α信号转导通路的影响.结果 4 mg/L PC-1NF融合蛋白作用48 h后,RMCⅣ型胶原mRNA从(103±16)降至(82±11)拷贝/106 GAPDH,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),培养上清液中的IV型胶原含量也明显降低;MMP2 mRNA从(1150±90)升至(2770±170)拷贝/106 GAPDH,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),而TIMP-1 mRNA从(5530±480)降至(3040±370)拷贝/106 GAPDH,与对照组差异有统计学意义(P＜0.01).DAB染色显示,融合蛋白作用后,RMC的c-jun和c-fos表达受到明显抑制.RMC经不同浓度PC-1NF融合蛋白作用48 h后,随着融合蛋白浓度升高,PKC-α的表达逐渐减弱.结论 PC-1NF融合蛋白可通过上调促进ECM降解的MMP-2和抑制ECM降解的TIMP-1之间的比值而促进Ⅳ型胶原降解;还可能通过PKC-α信号转导通路,抑制c-jun和c-fos表达,从而抑制RMC的增殖和ECM的合成.