碱性调宁蛋白对糖尿病大鼠烧伤创面成纤维细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨碱性调宁蛋白在糖尿病大鼠烧伤创面愈合过程中的表达情况及其对成纤维细胞增殖与凋亡的影响.方法 选64只雄性Wistar大鼠,按随机数字表法分为实验组和对照组,每组32只.实验组大鼠,腹腔注射链脲佐菌素60 mg/kg,制作糖尿病大鼠模型;对照组大鼠,腹腔注射0.9％氯化钠溶液1.0 mL.适应性饲养2周后将2组大鼠均制作为深Ⅱ度烫伤模型(以下称为烧伤),伤后立即液体复苏、常规治疗.观察两组大鼠的创面愈合时间及在伤后第7、14、21、28天的创面愈合率,创周切取组织、制作切片,行苏木精-伊红染色观察组织形态学变化,免疫组织化学SP法分析碱性调宁蛋白表达,成纤维细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,原位末端转移酶标记(TUNEL)法测定成纤维细胞凋亡情况.对数据行方差分析和t检验.结果 实验组大鼠创面平均愈合时间[(25.6±2.8)d]长于对照组大鼠创面平均愈合时间[(19.1±2.1)d],差异有统计学意义(t=10.49,P＜0.05);在伤后第7、14、21、28天,实验组大鼠创面愈合率分别为(18.8±4.6)％、(37.6±7.9)％、(66.3±11.4)％、(85.4±4.8)％,明显小于对照组[(40.8±4.5)％、(62.1±6.7)％、(90.2±9.7)％、(95.4±5.5)％,差异均有统计学意义(t =9.69、6.69、4.51、3.87,P值均小于0.05).伤后第7、14、21天,两组大鼠创面逐渐愈合,创面组织中成纤维细胞、新生微血管均逐渐增多,且对照组大鼠未愈合创面组织中成纤维细胞、新生微血管均较实验组增多.伤后第7、14、21、28天,实验组大鼠碱性调宁蛋白在烧伤创面组织中的表达分别为1.43 ±0.07、1.17±0.11、0.73 ±0.06、0.77±0.07,均高于对照组大鼠(0.75±0.09、0.60±0.10、0.63 ±0.06、0.64±0.10),差异均有统计学意义(t=17.58、10.92、3.44、3.10,P值均小于0.05).实验组大鼠成纤维细胞PCNA在烧伤创面组织中表达分别为654.19±102.80、820.84±112.86、766.68±156.63、232.75±55.37,较对照组(766.85±73.30、1322.22±121.44、1112.35±142.32、740.79±106.90)低,差异均有统计学意义(t=2.52、8.55、4.62、11.94,P值均小于0.05).伤后第7、14、21、28天,实验组细胞凋亡数分别为58.51±10.89、41.53 ±9.95、27.28±6.58、20.13 ±4.23,较对照组(30.70 ±6.41、25.31 ±5.74、17.46 ±5.36、15.29±4.10)高,差异均有统计学意义(t=6.23、4.00、3.27、2.32,P值均小于0.05).结论 碱性调宁蛋白在糖尿病大鼠烧伤创面愈合过程中表达水平增高,可能调控创面组织中成纤维细胞的增殖和(或)凋亡水平,是糖尿病创面延迟愈合的原因之一.