miRNA-146a对过氧化氢所致人胃腺癌细胞株AGS氧化应激损伤的影响

目的建立应激性溃疡细胞损伤模型，观察过氧化氢对人胃腺癌细胞株AGS的浓度及时间损伤效应，并探讨miRNA-146a对其调控作用。方法（1）将人胃腺癌细胞株AGS分为5组，每组4孔：其中4组在200μmol／L过氧化氢处理3、6、12、24 h，另1组为未处理组，分别检测人胃腺癌细胞株AGS脂质过氧化代谢产物丙二醛含量和超氧化物歧化酶（ SOD ）活力。（2）将人胃腺癌细胞株AGS分为6组，每组4孔，其中4组分别用50、100、200、400、600μmol／L过氧化氢处理6 h，另1组为未处理组，检测其丙二醛含量和SOD活力。（3）将人胃腺癌细胞株AGS分为2组，实验组和对照组，每组4孔，对照组不做处理，实验组用200μmol／L过氧化氢刺激6 h后，采用实时定量PCR法分别检测两组细胞miRNANA-146a的相对表达量。（4）将人胃腺癌细胞株AGS分为4组，每组4孔：未处理组、miRNANA对照组、miRNA-146a抑制组、miRNA-146a增强组。处理组分别转染miRNA-146a对照剂、miRNA-146a抑制剂和miRNA-146a模拟物，培养24 h后，用200μmol／L过氧化氢刺激6 h，检测细胞miRNA-146a表达、丙二醛含量和SOD活力。多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用LSD-t检验。结果（1）在200μmol／L过氧化氢刺激后，未处理组、不同时间培养组组间细胞丙二醛含量、SOD活力比较，差异均有统计学意义（F＝46．744、42．736，P值均小于0．01）；随着作用时间的延长，细胞丙二醛含量逐渐升高，在培养6 h时达到峰值（2．15±0．50）μmol／mg，然后逐渐降低；随着作用时间的延长，SOD活力逐渐降低，在培养6 h时达到最低（6．51±0．54） U／mg，然后逐渐升高。（2）用不同浓度的过氧化氢处理人胃腺癌细胞株AGS 6 h后，未处理组、不同浓度处理组组间细胞丙二醛含量、SOD活力比较，差异均有统计学意义（F＝152．786、129．231，P值均小于0．01）；随着浓度的增加丙二醛含量逐渐升高，600μmol／L处理组时最高（2．46±0．07）μmol／mg；随着浓度的增加SOD活力逐渐降低，600μmol／L处理组时最低（3．14±0．10） U／mg。（3）实验组人胃腺癌细胞株AGS miRNA-146a表达明显量高于对照组（t＝－17．398，P＜0．01）。（4）不同转染组用200μmol／L过氧化氢刺激6 h后，miRNA-146a增强组与未处理组、miRNA-146a对照组、miRNA-146a抑制组组间细胞miRNA-146a的相对表达量、SOD 活力和丙二醛含量比较，差异均有统计学意义（ F ＝232．643、1070．580、56．191，P值小于0．01）；miRNA-146a增强组数百倍高于其他3个小组，差异均有统计学意义（P值均小于0．01）；miRNA-146a增强组SOD活力均较miRNA-146a抑制组和miRNA-146a对照组高，差异均有统计学意义（P值均小于0．01）；miRNA-146a增强组丙二醛水平均较miRNA-146a抑制组和miRNA-146a对照组低，差异均有统计学意义（P值均小于0．01）。结论200μmol／L过氧化氢刺激人胃腺癌细胞株AGS 6 h能较好地建立应激性胃溃疡氧化损伤细胞模型，miRNA-146a可负性调控过氧化氢所致人胃腺癌细胞株AGS应激性溃疡的氧化应激反应。