穗花杉双黄酮调控人瘢痕成纤维细胞活性及凋亡的研究

目的 探讨穗花杉双黄酮调控人增生性瘢痕成纤维细胞生长与凋亡的作用机制.方法 将细胞接种于24孔板,分别加入不同浓度的穗花杉双黄酮(0、25、50、100、150、200 μmol/L),48h后,酶标仪检测490波长的吸光度.选取浓度为50 μmol/L和100 μmol/L的穗花杉双黄酮作为后续实验的用药浓度,以0 μmol/L穗花杉双黄酮为对照,加入到人增生性瘢痕成纤维细胞中作用48h,分别采用DAPI染色检测穗花杉双黄酮对人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用,Western blot检测穗花杉双黄酮对人增生性瘢痕成纤维细胞磷酸化AKT(p-AKT)及凋亡相关蛋白,如翻译控制肿瘤蛋白、BAX、caspase3、caspase8、caspase9的影响.结果穗花杉双黄酮对人增生性瘢痕成纤维细胞的活力具有剂量依赖性抑制作用,穗花杉双黄酮浓度为50 μmol/L以上与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).DAPI染色显示,穗花杉双黄酮具有诱导人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的趋势,与对照组相比,加药组细胞表现为细胞核深染、核膜皱缩、有凋亡小体形成.Westem blot显示,与对照组相比,AKT磷酸化水平降低;促凋亡蛋白RAX表达升高;抗凋亡蛋白TCTP表达降低;caspase3、caspase8、caspase9表达升高.结论穗花杉双黄酮可诱导瘢痕成纤维细胞凋亡,抑制其活力,有望成为临床治疗增生性瘢痕的一种有效药物.