人胰岛细胞消化与提纯改良方法研究

目的 探讨改良人胰岛细胞消化与提纯方法.方法 胰腺供体来源于20例成人公民逝世后器官捐献(DCD)供者捐献,由广州医科大学附属第二医院器官移植中心提供,且通过医院伦理委员会审查.供者男13例,女7例;平均年龄(45±7)岁.4℃的UW液腹主动脉灌注后迅速将胰腺切除,胰腺组织4℃UW液保存,胰管修剪后灌注胶原酶V,放入新型自制改良胰腺消化罐,38℃的胶原酶消化液恒温消化30 min,通过不连续密度梯度法分离提纯胰岛细胞,通过双硫腙(DTZ)染色显示胰岛细胞,计算胰岛当量.吖啶橙(AO)染色法测定存活率.结果 共消化20例成人胰腺,胰腺组织消化率为92.7％.单次消化的胶原酶使用量为400 ml.胰岛细胞经过DTZ染色后呈猩红色的类圆形胰岛细胞团.每条胰腺消化后的胰岛细胞当量为(69±28)×103 IEQ/g,提纯后为(53±29)×103 IEQ/g,纯度为79％.胰岛存活率为(94.1±2.3)％.结论 采用我院新型自制改良胰腺消化罐可获得良好的人胰岛素细胞消化和提纯效果,且可明显减少胶原酶的使用量.