磷脂酰肌醇蛋白多糖-3对Hippo信号通路的调控机制及其对肝癌Huh7细胞生物学行为的影响

目的 探讨磷脂酰肌醇蛋白多糖-3 (GPC3)对Hippo信号通路的调控机制及其对人肝癌Huh7细胞生物学行为的影响.方法 分别构建4种靶向GPC3和YAP1基因的shRNA序列,然后转染入肝癌Huh7细胞,并筛选稳定表达的细胞株.采用荧光定量PCR法和蛋白印迹法检测转染后的Huh7细胞中GPC3和YAP1的表达,以筛选有效沉默GPC3和YAP1的shRNA.观察沉默GPC3和YAP1以及人重组YAP1 (rhYAP1)对肝癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.GPC3 shRNA转染实验分为6组:未转染组、空载体组、GPC3-714-shRNA组、GPC3-647-shRNA组、GPC3-1718-shRNA组、GPC3-2134-shRNA组.YAP1 shRNA转染实验分为6组:未转染组、空载体组、YAP1-906-shRNA组、YAP1-1363-shRNA组、YAP1-1666-shRNA组、YAP1-2895-shRNA组.GPC3对YAP1的调控实验分为5组:未转染组、空载体组、GPC3-1718-shRNA组、GPC3-1718-shRNA+rhYAP1组、YAP1-1666-shRNA组.结果 ①成功构建了可有效沉默GPC3和YAP1表达的GPC3-1718-shRNA和YAP1-1666-shRNA质粒.②GPC3shRNA各转染组细胞中GPC3 mRNA和蛋白表达均明显低于未转染组(P＜0.05)和空载体组(P＜0.05),而GPC3-1718-shRNA组又明显低于其他转染组(P＜0.05).YAP1 shRNA各转染组细胞中YAP1 mRNA和蛋白表达均明显低于未转染组(P＜0.05)和空载体组(P＜0.05),而YAP 1-1666-shRNA组又明显低于其他转染组(P＜0.05).③GPC3-1718-shRNA组和YAP 1-1666-shRNA组细胞中YAP1 mRNA和蛋白表达均明显低于未转染组(P＜0.05)和空载体组(P＜0.05);而GPC3-1718-shRNA+rhYAP1组细胞中YAP1 mRNA和蛋白表达明显高于GPC3-1718-shRNA组(P＜0.05)和YAP1-1666-shRNA组(P＜0.05).④与未转染组和空载体组比较,GPC3-1718-shRNA组和YAP1-1666-shRNA组的细胞增殖和侵袭能力明显降低(P＜0.05),细胞凋亡明显增加(P＜0.05);而GPC3-1718-shRNA+rhYAP1组细胞增殖、侵袭和凋亡均得到明显改善(P＜0.05).结论 GPC3很有可能通过对Hippo信号通路YAP1的调控,实现其对人肝癌细胞Huh7生物学行为的影响.