人前列腺癌PC-3细胞系中肿瘤干细胞的富集、鉴定以及生物学特征的初步研究

目的 从人前列腺癌PC-3细胞系中分离、富集并鉴定前列腺癌干细胞,探讨具有肿瘤干细胞特性的侧群(SP)细胞与未分选的总体细胞(NST)之间的生物学行为差异.方法 采用无血清培养液(SFM)悬浮细胞聚球法体外培养PC-3 细胞系.以PC-3悬浮成球细胞为实验组,常规以含血清培养液(SSM)中单层贴壁培养的PC-3细胞为对照组,通过流式细胞技术检测两种细胞中CD44+、CD133+细胞及SP细胞比例.通过生物学功能实验比较两种细胞的增殖、血管生成、迁移、侵袭能力的差异.结果 PC-3成球细胞可以在SFM中生存并形成悬浮细胞球.PC-3悬浮成球细胞具有自我更新和分化能力,在体外可以连续、稳定传代,在SFM中滴加血清后可以分化,交替培养于SSM和SFM中可以实现与贴壁细胞之间的相互转化.PC-3悬浮成球细胞中CD44+、CD133+细胞及SP细胞比例均显著高于常规培养的PC-3贴壁细胞(P<0.05).相对于NST细胞,SP细胞具有更强的迁移、侵袭和血管生成能力,而SP细胞增殖能力则相对较弱.RT-qPCR和Western blot实验发现SP细胞中缺氧诱导因子2α(HIF-2α)、血管生成因子(VEGF)和基质金属蛋白酶(MMP)基因和蛋白水平均高于NST细胞.结论 PC-3悬浮成球细胞具有肿瘤干细胞特性,采用无血清悬浮细胞聚球培养法可以从PC-3 细胞系中简便、高效地富集前列腺癌干细胞.从人前列腺癌PC3细胞系分离出的SP细胞的血管生成、迁移、侵袭能力均强于NST细胞,而增殖能力却弱于NST细胞.