合成角质细胞生长因子活性短肽促进表皮细胞增殖的实验研究

目的 应用噬菌体随机7肽库筛选角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)的关键序列,进行KGF活性短肽的调整和合成,并研究其对表皮细胞增殖的作用.方法 以KGF单克隆抗体为靶,筛选噬菌体随机7肽库,获得KGF的特异性序列,并进行序列调整.用免疫荧光法检测KGF活性短肽的表皮细胞亲和力.用CCK-8法检测KGF活性短肽对表皮细胞增殖的影响.用RT-PCR法和Western-blot法检测表皮细胞上特异性受体KGFR的表达水平.结果 筛选噬菌体随机7肽库,获得2个与KGF相似的特异性序列,合成获得2个KGF活性短肽,并纯化至98%纯度,短肽的C端进行氨基化封闭,N端进行罗丹明激光染料标记.免疫荧光检测结果显示,2个KGF活性短肽均能够与表皮细胞相结合.CCK-8检测结果显示,与阴性对照组相比,2个KGF活性短肽能够促进表皮细胞增殖,并呈浓度依赖性.RT-PCR和Western-blot检测结果显示,2个KGF活性短肽组中表皮细胞表达KGFR增强.结论 从噬菌体随机7肽库中筛选到2个KGF的关键序列,合成的2个KGF活性短肽能够与KGFR相结合,并增强KGFR的表达,从而促进表皮细胞增殖,有望应用于促进创面愈合.