SIRT1对高糖高脂培养胰岛微血管内皮细胞eNOS表达及活性的影响

目的 分析高表达组蛋白去乙酰化酶(sirtuin 1,SIRT1)对高糖高脂培养胰岛微血管内皮细胞(islet endothelial cells,IEC)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达及活性的影响.方法 合成含绿色荧光蛋白报告基因的小鼠SIRT1基因重组质粒,以Lipofectamine 2000转染IEC后以高脂或高糖高脂处理48 h.高脂组以0.5 mmol/L棕榈酸处理;高脂高糖组以33.3 mmol/L葡萄糖+0.5 mmol/L棕榈酸处理.应用Western印迹法检测SIRT1基因转染效果;应用实时荧光定量PCR及Western印迹法检测eNOS的基因及蛋白水平;应用硝酸还原酶法检测培养细胞上清中NO的水平.结果 相对于正常对照组,高脂培养IEC eNOS基因及蛋白水平无明显变化;但高脂高糖环境下,eNOS的基因及蛋白水平明显下降.高表达SIRT1不仅可升高高脂培养内皮细胞eNOS蛋白表达,且可升高高脂高糖培养内皮细胞eNOS mRNA及蛋白表达.相对于正常对照组,高脂培养使内皮细胞分泌NO水平明显下降,高糖高脂培养使内皮细胞NO水平进一步下降,高表达SIRT1不仅可升高基础状态下内皮细胞的NO水平,且可升高高脂、高脂高糖培养内皮细胞的NO水平,差异具有统计学意义.结论 SIRT1可改善高糖高脂培养胰岛微血管内皮细胞的eNOS表达及活性,使内皮源性NO分泌增加,因而可能有助于改善胰岛B细胞功能,在糖尿病的药物开发、基因治疗及胰岛移植治疗中具有广阔的前景.